样本要求
样本量要求
NMR平台 500ul/样
GC-MS平台 200ul/样
LC-MS平台 200ul/样
样本收集
- 采集血样，静置30分钟，血液凝固；
- 取液体部分进行离心分离，4摄氏度，3000转每分钟（rpm），5分钟；
- 离心后取上层清液 （一般为淡黄色）， 每个样本至少需取500微升生物量， 准确记录并进行编号。此过程中要求每个生物学重复样本所用的时间一致，而且血样在室温放置不超过3个小时，4摄氏度保存不应超过24小时，以防止血液中的代谢物发生变化。
- 冰冻样本，将血清样本至于-80度冰箱冰冻保存。
注意事项
- 采血过程中注意消毒，防止微生物污染；
- 离心速率建议不宜过快，以免血细胞破碎；
- 准确记录每个样本收集的血清样本体积；
- 血清样本冰冻后避免反复冻融；
- 在运输样本过程提供冰盒干冰保证低温（环境）；
- 如果制备血浆样本，NMR平台宜用肝素钠抗凝，GC-MS、LC-MS平台宜用EDTA抗凝； 如果计划做多平台检测分析，建议各平台都制备血清为宜，且需要提前分装保存；
- 用于NMR平台分析的样本如果储存在-80度环境超过3个月，则需要加入微生物抑制剂（建议添加叠氮化钠溶液（0.0025mol/L）20微升）；用于GC-MS、LC-MS样本不应添加任何微生物抑制剂。
样本量要求
NMR平台 50mg冻干粉/样=500mg鲜重/样
GC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
LC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
样本收集
- 取得粪便样本后迅速放入液氮速冻；
- 迅速转入-80℃冰箱保存，期间不得反复冻融；
- 全程干冰运送。
注意事项
- 粪便样本在肠道里形成时间和区段不一样，含有微生物的量以及形成的成分不一致，因此所选择样本的节段不同，最终测到的代谢物也会因为个体的差异性而比较大；
- 若不能确定是否选择同一节段的粪便样本，建议先取大量样本如8-10克鲜样，并将样本混匀后进行后续实验，避免带来的个体差异太大；
- 新鲜的样本因为含水量的差异，称量样本的质量会受到影响，建议先冻干粪便样本，再继续后续实验。
样本量要求
NMR平台 50mg冻干粉/样=500mg鲜重/样
GC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
LC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
样本收集
- 4℃下离心收集样本；
- 加入缓冲溶液或生理盐水（防止反渗透或细胞膜破碎）清洗样本3-5次，以去除培养液或胞外物质；
- 将装有清洗好的样本的离心管（盖好管盖）直接放到液氮罐中淬灭细胞（无需研磨,此项过程的目的是灭活）；
- 将淬灭过的细胞样本放入-80℃冷冻5h以上，然后使用冷冻干燥机进行干燥，最终得到冻干粉末；
- 冻干粉仅需普通冰盒运输即可。
注意事项
- 为得到最佳谱图质量以得到最好的分析结果，强烈建议每个生物学重复的冻干粉量在不计算管壁粘附的情况下，至少达到50 mg以上；
- 细菌样本量的含盐量保证低于0.9%；
- 细菌样本中不含金属如Fe、Mn、Ni等；
- 样本在清洗过程中尽量保证细胞不被破坏。
- 冷冻状态下（冰面）取600毫克新鲜样本于离心管中，放入-80℃冰箱中冷冻2h，使样本保持稳定的冷冻状态；
- 先把冷冻干燥机打开，调整温度至-50℃预冷，再取样本；
- 将样本放入装有干冰的保温盒内，运送到冷冻干燥机处；
- 在装样本的离心管盖上戳几个洞（直径5㎝的盖子留3个直径3㎜的孔洞,盖直径大一点的可以稍微多留一两个洞），以保证冷冻干燥机抽真空的时候不会喷样。
- 冷冻干燥72小时，可适当延长冻干时间，确保样本冻干（无水分）。
- 冰盒寄送。
注意事项
- 为了防止操作过程中样本有损失造成的样本量不足的情况，在取样时尽量多取，如有条件则可取完后快速称量；
- 离心管盖预留的孔洞须小于样本直径，否则样本会被真空抽出；
- 冻干时间是依据型号为LABCONCO Freezone2.5的冻干机提供的，且冻干机维护的比较好，效能良好，效能稍低的冻干机应适当延长冻干时间；
- 由于是整块组织样本冻干，接触面积小，所以比颗粒或粉末样本冻干要慢，可以适当延长冻干时间，以防外部冻干后中心还有水分。
样本量要求
NMR平台 500ul/样
GC-MS平台 200ul/样
LC-MS平台 200ul/样
样本收集
- 对尿液样本进行编号以及做好临床样本的采样信息记录；
- 取尿液大于1mL，在4摄氏度保存，静置；
- 取1mL尿液进行离心分离，4摄氏度， 10000rpm， 5分钟； 离心后取500微升上层清液，并加入微生物抑制剂（建议加叠氮化钠溶液20微升（0.0025mol/L））；GC-MS、LC-MS平台不添加任何微生物抑制剂；
- 冰冻样本，迅速将尿液样本置于-80度冰箱冰冻保存，直到实验。
注意事项
- 为了排除样本（特别是女性样本）所引进的微生物干扰，NMR平台的样本需要加入微生物抑制剂；
- 尿液样本不能及时进行离心处理，务必放入到4摄氏度的冰箱中静置保存，但不宜超过24小时；
- 尿液样本在进行前处理时保证每个生物学重复样本所有的时间一致；
- 注意样本冰冻后避免反复冻融，如果需要做其他生化检测应提前分装保存；
- 临床样本需要记录的采样信息：
性别； BMI； 年龄； 种族； 饮食结构； 过往病史； 是否有其他疾病干扰； 采样时间； 采样方式； 采样地； 采样量。
样本量要求
NMR平台 50mg冻干粉/样=500mg鲜重/样
GC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
LC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
样本收集
- 取得组织样本后迅速放入液氮速冻；
- 在液氮条件下将冻好的组织样本研磨成粉；
- 尽可能将样本研磨细腻和均匀；
- 液氮研磨过程中液氮不宜过少，防止样本研磨过程中融化；
- 液氮研磨成粉后，样本应在-80℃保存5h以上或过夜存储，然后再于真空冷冻干燥机中抽为冻干粉状态；
- 每个生物学重复需要提供至少50 mg/个的干粉生物量；
- 运输过程仅需要普通冰盒运输即可。
注意事项
如果样本还需要做其他检测，应提前分装保存，不应反复冻融。
样本量要求
NMR平台 50mg冻干粉/样=500mg鲜重/样
GC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
LC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
样本收集
- 每个生物学重复取相同的一体积细胞悬浊液（至少保证1Volume = N×10e^7 cells, N>1。为得到最佳谱图质量以得到最好的分析结果，强烈建议每个生物学重复的冻干粉量在不计算管壁粘附的情况下，至少达到50 mg以上），离心收集后用生理盐水清洗3-5次，以去除胞外物质；
- 将清洗好的样本装入离心管中（盖上管盖），直接放入液氮罐中淬灭细胞 (无需研磨,此项过程的目的是灭活)；
- 将淬灭过的细胞样本放入-80℃冷冻，然后使用冷冻干燥机进行干燥，最终得到冻干粉末。
注意事项
- 细胞样本量的含盐量保证低于0.9%；
- 细胞样本中不含金属如Fe、Mn、Ni等；
- 样本在清洗过程中尽量保证细胞不被破坏。
- 准备研钵，药匙，冻存管，试管架，手套，液氮，泡沫保温盒；
- 将研钵，杵棒放入到泡沫保温盒中，向泡沫保温盒中加入液氮但液面不超过研钵，待液氮沸腾停止，即研钵和杵的温度与液氮达到平衡；
- 放入样本至研钵中，倒入少量液氮，研磨至粉末状。注意戴好手套研磨，以免冻伤；
- 研磨好的粉末样本迅速放入到已经编号且预冷的冻存管中。并快速的放入到-80度冰箱保存，以免样本融化。
注意事项
- 研磨时需要尽可能用力，使样本能够磨得细腻和均匀；
- 注意不要使样本融化；
- 样本编号要提前准备好，以免混淆；
- 为了节省研磨时间，建议准备多个研钵同时磨样，但需要注意每个研钵研磨完一个样本后需清洗才能研磨下一个，避免样本混淆；
- 清洗研钵经验：先用无尘纸将研钵内固体粉末擦干净，然后用纯水仔细清洗3次（如有需要可增加次数），保证研钵和研杵都已清洗干净，然后用无尘纸将其擦干备用（此过程注意防冻伤保护）。